棕榈酒分离物油气利用酵母的分离与鉴定

1。介绍

已报道降解碳氢化合物的各种微生物种群细菌、酵母菌或霉菌。这个

报告的生物降解效率从真菌的6%到82%，土壤细菌的0.13%到50%，还有

P. O. Okerentugba等人。

六十四

海洋细菌0.003%～100% [ 1 ]。

酵母菌是真核微生物，在真菌界分类，目前约有1500种。

识别和描述。他们估计在所有的真菌种类，[ 2 ]和措施多达3 - 4μM 1%

直径可达40μM取决于物种[ 3 ]。

最年轻的酵母菌落湿润，外表有些粘糊糊的，也可能出现粉状。颜色

大多数菌落呈白色、奶油色或粉红色，随着年龄的增长而变小，但其他的则变得干燥。

有皱纹的.酵母菌是氧化的、发酵的或两者都有。氧化酵母（膜酵母）可以作为薄膜或浮渣生长。

在液体介质的表面，发酵酵母在液体中生长[ 4 ]。他们是chemoorganotrophs，

因此，他们利用有机物作为能源[ 5 ]的来源，他们可能是需氧菌，兼性

但从未严格厌氧菌或厌氧菌[ 6 ] [ 7 ]。

酵母广泛分布于环境中。它们在中性或微酸性ph环境中生长最好。

有些是正常的皮肤表面上的菌群；其他的是寄生的或共生的，通常在环境中很常见。

哪里有糖丰富的物质。有些与土壤和昆虫有关[ 7 ] [ 8 ]。

[ 9 ]报告说，棕榈酒是一种包括细菌、丝状菌在内的不同类型微生物的悬浮液。

真菌和酵母菌。酵母产于棕榈酒中，作为本地微生物区系，主要来自酿酒酵母属，

裂殖酵母、毕赤酵母，假丝酵母、Kleockera、Hansenula、拟内孢霉和saccharomycoides

[ 10 ] [ 12 ]。

有几项研究报告了不同酵母利用碳氢化合物的能力。酵母菌的牵连

在以往的研究中属：念珠菌、Clavispora、毕，掷孢酵母属，Sporidiobolus，

Stephanoascus、Debaryomyces，lodderromyces，白冬孢酵母属，梅奇酵母，红酵母，酵母菌菌株，

孢和解[ 7 ] [ 13 ] [ 14 ]。无论这些研究的报告如何，都缺乏

从非石油污染环境中获得的酵母降解碳氢化合物的能力

这突出了本研究的相关性。

本研究旨在对棕榈酒（棕榈酒）中的酵母菌进行分离和鉴定。

降解石油烃的能力。本研究的目的是：

1）用形态学和分子生物学方法从棕榈酒中分离和鉴定酵母菌。

2）测试菌株对石油烃的生物降解作用。

2。材料与方法

2.1。样品的采集

从壳牌石油开发获得尼日利亚Bonny轻质原油在本研究中所使用的原油

公司（SPDC）有限公司，哈科特港，尼日利亚。

从棕榈得到新鲜的棕榈酒酵母分离进行了研究（raphiaraphia）掌

Choba酒园，欧比亚/ Akpo油田的地方政府区域，河流州。样品立即被运送。

用无菌冰袋装在实验室的无菌容器中进行分析。

2.2。实验设计

2.2.1。试验生物分离

一毫升棕榈酒接种于200毫升灭菌的矿物盐肉汤[ 15 ]，如[ 16 ]所述。

原油样品进行过滤和蒸压在121˚C 15分钟，无菌和冷却时加入

接种在适当的混合浓度为1%（v/v）。孵育十四天。

在室温（25˚C±2˚C）无晃动。

扩散板技术进行接种培养菌株的存活。有玻璃的展开棒

消毒酒精和火焰被用于这个程序。0.1毫升以上的浓缩培养基

接种到矿物盐琼脂板组。

根据[ 17 ]，无菌滤纸（Whatman 1号）饱和原油放在里面

每个培养皿的盖板。接种的培养皿保持在倒置的位置并孵育。

25˚±˚C 2 C五天。这些过滤器文件提供的烃类的气相转移到培养

分离。

接种0.1毫升新鲜的棕榈酒到无菌矿物获得了不适应的微生物

盐琼脂板采用平板涂布法组。含原油滤器的琼脂平板

纸和培养25˚C±2˚C在倒立位置十四天。

P. O. Okerentugba等人。

六十五

可行的分离上述媒体进行纯化，采用Sabouraud dextrose agar（平衡蛋白胨水

1号10克，Dextrose 40克，琼脂2号12克，ph 5.6·0.2）。适应和不适应得到纯菌株

无菌接种于琼脂斜面在麦卡尼瓶。这些被孵育于可行的分离上述媒体进行纯化，采用Sabouraud dextrose agar（平衡蛋白胨水

1号10克，Dextrose 40克，琼脂2号12克，ph 5.6·0.2）。适应和不适应得到纯菌株

无菌接种于琼脂斜面在麦卡尼瓶。这些孵育25˚C±2˚C 48

小时.这些股票的文化都保存在冰箱4˚C为将来使用。获得酵母菌株

前缀字母PW（棕榈酒）如PW PW 01，02株分别为第一和第二。识别

对酵母菌株进行了形态学和生化的宏观和微观检查。

属性[ 18 ]。48小时培养的湿支架用于显微镜检查。

进行菌株代谢碳水化合物的能力是糖发酵试验

如葡萄糖、乳糖、半乳糖、海藻糖、肌醇、麦芽糖、半乳糖醇、蔗糖和棉子糖的

生产酸、气或两者。

2.2.2。生物降解潜力筛选

采用改良的[ 19 ]方法进行筛选试验。一滴培养的菌株进行培养48小时

接种到无菌的100毫升的细菌-布什内尔哈斯肉汤含有无菌粗油1毫升（1% V / V）和1

毫升的氧化还原指示剂（2% V / V的2,6-二氯酚吲哚酚衍生物）。还设置了一个不含微生物的控制系统。

这套机器已放置15天了。总烃含量（油和脂）根据

对api-rp45方法用分光光度计。样品以1:10的比例提取两次。

二甲苯样品。离心后采用二甲苯为分光光度计读联合提取

参考资料。以前用原油校准过分光光度计。读数

从分光光度计上描出刻度图，计算浓度。

THC（油和润滑脂）在毫克/升[ 20 ]。用分光光度计测定总烃含量在420 nm处。

科宁253。

计算：

THC吸收梯度萃取体积VO =×××体积的稀释剂。

2.2.3。试验菌株的分子鉴定

纯粹的潜在压力保持在Sabouraud麦卡尼瓶葡萄糖琼脂斜面培养

在生物技术中心认定，联邦农业大学，Abeokuta，Ogun州（funaab）和

microgen美国采用脱氧核糖核酸（DNA）提取脱氧核糖核酸（DNA）测序

顺序爆破对美国国家生物技术信息中心（NCBI）。进行dna提取。

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